SU-DHL-4人B淋巴瘤細(xì)胞(STR鑒定報告)

　　SU-DHL-4細(xì)胞（提供STR鑒定報告）

　　（1）英文名稱：SU-DHL-4

　　（2）中文名稱：人B淋巴瘤細(xì)胞

　　（3）細(xì)胞描述：該細(xì)胞系建系于1976年，來自38歲白人男性的腹膜滲出物。該細(xì)胞系有14號、18號染色體易位。在BCL-2基因中有一個主要的重排。該細(xì)胞系對念珠菌攝入呈陰性。有資料顯示該細(xì)胞對愛潑斯坦-巴爾病毒（EBV）呈陰性。經(jīng)本庫STR檢測結(jié)果無誤。STR結(jié)果如下：D5S818:11,12；D13S317:11,12；D7S820:8,11；D16S539:11,13；vWA:18,19；THO1:6,9.3；Amelogenin:X Y；TPOX:9,11；CSF1PO:12

　　（4）規(guī)格：T25方瓶或1ml凍存管

　　（5）細(xì)胞數(shù)量：1×10^6

　　（6）組織來源：人B淋巴細(xì)胞瘤

　　（7）生長方式：懸浮生長

　　（8）細(xì)胞形態(tài)：淋巴細(xì)胞樣

　　（9）培養(yǎng)液：RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

　　（10）培養(yǎng)條件：37℃，5%CO2

　　（12）運(yùn)輸方式：常溫運(yùn)輸（T25方瓶）或干冰運(yùn)輸（凍存管）

　　細(xì)胞處理：

　　1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

　　將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

　　2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

　　1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

　　3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

　　3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

　　下面T25瓶為例；

　　1.細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

　　2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

　　3.將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

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