MV-4-11人髓性單核細胞白血病細胞zlzt生物

　　MV-4-11人髓性單核細胞白血病細胞由Rovera課題組建立，來源于一名患有人雙表型髓性單核細胞白血病（biphenotypicBmyelomonocyticleukemia）的10歲男孩的外周血。Interleukin(IL)-3可以獨立地支持該細胞長期生長，使用10%FBS培養時則不需要額外添加IL-3。但是，在IL-3和生長因子Granulocyte/Macrophagecolony-StimulatingFactor（GM-CSF）均處于低濃度的情況下，IL-3會抑制MV-4-11細胞的增殖。

　　生長因子GranulocytecolonyStimulatingFactor（G-CSF）會協同GM-CSF促進MV-4-11細胞的增殖，而單獨的G-CSF會短暫刺激該細胞系。據文獻[PubMed:3500218]報道，間接免疫熒光法檢測髓性單核細胞抗原CD15，超過96%的該細胞為陽性，40~96%為單核細胞抗原CD4陽性，4-11%為單核細胞抗原CD10陽性。

　　細胞特性

　　1）來源：男性，10歲外周血

　　2）形態：成淋巴細胞狀，懸浮生長

　　3）含量：>1x10^6細胞數

　　4）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　5)用途：僅供科研使用。

　　運輸和保存

　　干冰運輸及復蘇好存活細胞

　　（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

　　（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

　　細胞接收后的處理

　　1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

　　2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

　　一．培養基及培養凍存條件準備：

　　1）準備IMDM培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

　　備注：

　　a)該細胞為懸浮細胞，傳代時使用【半換液法】對細胞狀態較為有利，因此我庫建議您使用【半換液法】進行傳代。如你收到的細胞為15ML離心管發貨的細胞，請不要通過離心的方式收集細胞，可以直接向培養瓶中添加等體積的新鮮培養液，然后將細胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養瓶中繼續培養即可。如你收到的細胞為T25培養瓶發貨的細胞，通過離心收集細胞后，添加8-10ml按照要求配置的新鮮培養液然后將細胞吹打均勻后移入兩個新的T25培養瓶中繼續培養即可。

　　后續建議您使用【半換液法】進行傳代。

　　b)細胞對血清質量較為敏感，我庫建議您使用進口大品牌優質血清進行培養。

　　c)該細胞對細胞密度較為敏感，培養、傳代時請注意保持細胞密度在合適的范圍。細胞接種密度20萬個/mL，培養時維持細胞密度在10萬-100萬個/mL

　　2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

　　3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

　　二．細胞處理：

　　1）凍存細胞的復蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

　　懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1×105~1×10^6個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

　　下面T25瓶為例；

　　1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml.

　　2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

　　將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

　　注意事項

　　1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

　　2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。

　　3.由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。